高效靶向：ERA 基础扩增试剂的性能表征与科研价值挖掘

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《Ultrasensitive, Specific, and Rapid Detection of Mycoplasma pneumoniae Using the ERA/CRISPR–Cas12a Dual System》（影响因子5.2）一文发表于《Frontiers in Microbiology》，由南华大学衡阳医学院团队研发了一种整合酶促重组扩增（ERA）与 CRISPR–Cas12a 技术系统的肺炎支原体新型检测模式。该研究的核心科研价值在于依托ERA技术的高效等温扩增特性，与CRISPR技术的精准识别能力有机结合，完善了精准检测体系，为肺炎支原体在科研应用提供了有力的数据支撑与实践参考。

核心原理技术
该检测体系以ERA高效扩增为核心，采用GenDx Basic ERA Kit（KS101）搭配CRISPR-Cas12a技术形成的检测机制，其中ERA技术展现出快速、高效、稳定的等温扩增能力，为后续CRISPR-Cas12a的高灵敏度与高特异性检测奠定了坚实基础，是实现“30分钟快速检测”的关键一环。

一、工作流程

实验材料：肺炎支原体标准菌株（M129, ATCC 29342）及 9 种对照菌株。

1.核酸提取：参照试剂盒说明书提取各菌株及实验样本的基因组DNA，置于-80℃低温保存备用，确保核酸完整性与稳定性。

2.标准质粒构建：克隆肺炎支原体P1基因269bp保守片段至pUC57载体，构建标准质粒并进行梯度稀释（10⁶~10⁰拷贝/μL），用于后续灵敏度验证实验。

3.ERA快速扩增：分别构建荧光检测体系与试纸条检测体系，以ERA技术参数优化为核心，重点调整ERA引物浓度、反应温度与时间，同时适配优化特异性识别组件浓度，确定兼顾扩增效率与识别准确性的最优反应条件。

4.性能验证：以梯度稀释的标准质粒验证系统灵敏度；以9种对照菌株验证系统特异性；选取92份实验样本（经qPCR验证，56份阳性、36份阴性）进行适用性验证，以qPCR检测结果为金标准，计算阳性预测一致性（PPA）与阴性预测一致性（NPA），评估系统实际应用价值。

二、结论输出

灵敏度：ERA/CRISPR–Cas12a 荧光系统最低检测限达 1 拷贝 /μL，与商用 qPCR 灵敏度相当；试纸条系统最低检测限为 100 拷贝 /μL，满足临床检测需求；

特异性：对 9 种对照菌株均无交叉反应，荧光系统与试纸条系统特异性均为 100%；

临床性能：荧光系统对临床样本的 PPA 和 NPA 均为 100%，与 qPCR 结果完全一致；试纸条系统 PPA 为 92.86%、NPA 为 100%，临床一致性优异；

检测速度：核心依赖ERA技术的快速扩增能力，ERA扩增仅需15分钟，后续特异性验证耗时15~20分钟，核心流程合计仅需30分钟，凸显了ERA等温扩增技术的高效优势。

三、优势

ERA技术具备超灵敏检测/高特异性/快速高效/操作简便等优势，本研究成功构建 “高效扩增 + 精准识别” 的技术整合，有效解决了传统检测技术灵敏度不足、操作复杂、耗时久、场景适配性差等问题。未来将进一步优化ERA试剂稳定性与样本处理流程，拓展其在环境样本、模型样本等场景的应用范围，提升技术转化价值。