如何选择一款质量上乘且价格实惠的ELISA试剂盒？

临床医师

大家知道市面上任意品牌一个ELISA试剂盒售价在千元以上，如果选错试剂盒，轻则损失一笔科研研究费，重则毁掉整个实验课题。面对市场琳琅满目的试剂盒，要挑选合适的并非是一件易事。那么，如何选购一款质量上乘且价格实惠的试剂盒呢？本文为大家盘点选购试剂盒的一些技巧。
一、在选择ELISA试剂盒前，关键一步是预估您待测样本中目标蛋白的大致浓度范围。您可以通过以下途径获取参考信息：
1.查阅文献：在NCBI(PubMed)等数据库中，搜索与您研究的物种、样本类型（如人血清、小鼠脑组织）相关的文献，查找目标蛋白的报道浓度。
2.利用数据库：查询UniProt、Pax-Db等蛋白质数据库，了解蛋白在不同组织或细胞中的表达丰度信息。
获取预估浓度后，将其与意向购买的ELISA试剂盒说明书中标注的检测范围进行比较。理想情况下，您样本的预估浓度应落在试剂盒检测范围的中部区域，这样可以获得最准确的定量结果。如果预估浓度远高于检测上限，则需要考虑后续实验中对样本进行适当稀释。
二、 正确选择ELISA试剂盒，首先要确保其与您的实验设计完全匹配。第一，核对应用种属，由于抗体的高度特异性，除非特别说明，否则不同物种的试剂盒不能通用。第二，确认支持的样本类型，需确保试剂盒适用于您的血清、血浆、细胞上清或裂解液等样本。值得注意的是，针对不同样本类型，试剂盒可能会提供不同的样本稀释液，切勿混用，以免复杂的样本基质干扰检测结果。
三、 请务必关注试剂盒的检测范围（即标准曲线范围）。为保证结果的准确性，待测样本的最终浓度必须落在此区间内。如果样本原始浓度过高，建议先通过预实验找到合适的稀释倍数，再进行正式测量，以避免因读数超出检测上限而导致数据无效。
四、一个高质量的ELISA试剂盒，其说明书中通常会提供详细的性能验证数据。在选购时，重点关注以下两项指标，可以帮您判断试剂盒的可靠性。
a.稀释线性
稀释线性是指将高浓度的待测样本用样本稀释液进行一系列梯度稀释后，测定其浓度。理想情况下，测得的浓度乘以其对应的稀释倍数后，应得到一个近似恒定的值，并在图上呈现良好的线性关系。
良好的稀释线性（通常要求在80%-120%范围内）表明该试剂盒在不同浓度下均能提供可靠的测量结果。这对于您选择样本的最佳稀释倍数，以及确保稀释操作不影响结果准确性至关重要。
b.加标回收率
加标回收率是指在一个已知含有低浓度（或不含）目标蛋白的真实样本中，人为加入（即“加标”）一定量的标准品，然后测量其总浓度。通过计算（实测值-样本本底值）/加标值×100%，来判断有多少被添加的标准品被成功“回收”。
这个指标直接反映了样本基质的干扰程度。血清、血浆等复杂样本中可能存在干扰物，影响抗原抗体的结合。良好的回收率（通常要求在80%-120%范围内）证明该试剂盒的抗干扰能力强，能够准确测定您特定类型的样本。
验收标准：

总的来说，一个性能优异的ELISA试剂盒，其稀释线性和加标回收率都应稳定在80%-120%的范围内。低于或高于此范围，都可能意味着检测结果存在系统性偏差。
五、试剂盒其它指标
1、精密度：即实验的重复性，通常用变异系数(CV%)来表示，CV%越小代表结果越稳定。
2、板内差异：反映在同一次实验中，重复样本的检测一致性。通常要求CV%<10%。
3、板间差异：反映在不同批次或不同时间的实验中，重复样本的检测一致性。通常要求CV%<15%。
4、灵敏度：指试剂盒能够稳定检测到的目标蛋白的最低浓度。如果您的样本中目标蛋白含量极低，务必选择灵敏度更高的试剂盒（即LOD数值更小）。
5、特异性：指试剂盒仅识别目标蛋白，而不与其他结构相似分子（如蛋白家族的其他成员或亚型）发生交叉反应的能力。

如何判断：优秀的试剂盒会提供交叉反应数据，证明其对相关分子的反应率极低。试剂盒的特异性主要由其核心组分——抗体对的质量决定。无论是采用双单克隆抗体，还是高质量的单克隆与多克隆抗体组合，关键在于其经过了严格的交叉反应验证。
6、简便性：在满足前述所有技术要求的前提下，操作步骤更少、实验耗时更短的试剂盒能有效提升实验效率，也是一个值得考虑的因素。
7、文献引用：产品的文献引用特别是高质量的SCI文章的引用是很多用户都关心的问题，这是业界对产品认可的一个非常重要指标，而且对相关用户的科研有一定的借鉴作用。
选择ELISA试剂盒，远不止是简单的货比三家。它是一场严谨的、基于数据的科学评估。正如本文所展示的，一个明智的决策过程，始于对自身样本的深入预估，贯穿于对种属、样本类型、检测范围的精准匹配，最终落脚于对试剂盒说明书中稀释线性、加标回收率、精密度、灵敏度及特异性等硬核性能指标的细致审查。

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/1925957974200910489