免疫胶体金稀释液配方优化经验

临床医师

研发总结可参考文章：胶体金法免疫层析技术原理及研制方法总结



制备好抗原/抗体-胶体金复合物后，稀释到一定浓度，吸附于惰性介质中制成最终产品。一般来说，惰性介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。优化经验总结如下：
1、合适的离子种类、强度和pH
免疫胶体金毕竟是含有生物活性分子，应用时还要面对千差万别的样品，原则上需要稀释在合适PH的缓冲液中。经验值是6-9。在这个范围内可选的缓冲主要有Tris和PB，PB更为常用，也不排除其他种类缓冲适用的可能。当使用的缓冲离子强度过大如超过0.2M时，有可能造成释放、层析不好或检测结果异常。离子的种类也因为免疫胶体金的生物分子不同而有诸多限制，例如钙调蛋白可能与Ca离子有关系。而卤素离子强度对胶体金稳定性似乎有特殊的破坏作用，教科书式的NaCl调试最适标记条件就是例子。
2、大分子物质
无纺布材料的工艺由于干燥过程快，多数采用烤干的工艺，但是大分子的骨架作用仍然是对产品的释放速度和比率有很大帮助。常用大分子物质如PEG4000、PEG20000、PVP等，从中对比选择合适浓度的一种添加使用。
3、小分子物质
蛋白储存常用的甘油、蔗糖、海藻糖、各类低聚糖等，对产品的储存稳定性有帮助，忽略这部分物质的添加可能限制产品从实验室走生产和市场。这类物质也是冻干细胞常用的。蔗糖、海藻糖较为常用，甘油不易干燥。
4、惰性蛋白
这类物质的功能就更复杂。首先还是保护目的蛋白的活性，也维持胶体金的胶体稳定，它们是消除非特异性的封闭物质，也起着有分散胶体金颗粒的骨架作用。常用有BSA、OVA、Casein，其他廉价蛋白似乎不太好找，脱脂奶粉个人建议不用，质量太难控制了，当然如果大家已经在用而且效果不错，也没有必要过于担心。
5、表面活性剂
这个东西是万万不能缺少，但是吸附材料已经用表面活性预处理的，也可以不拘泥于添加在免疫胶体金稀释液里。一般情况下，Tween20就可以了，其实蛋白质复性常用的非离子型表面活性剂都可以一试，有人说TritonX-100等可能会干扰蛋白的N末端建议不要用，可能是针对某一类或某一特定产品，如果大家在用TritonX-100，验证下有无影响即可，不用过分担心。

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