恒温扩增LAMP技术

生物科研实验室

什么是LAMP？      环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是Notomi等人于2000年提出来的一种新的核酸扩增技术。针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在链置换DNA聚合酶（Bst  DNA  polymerase）作用下，可以在60-65℃温度范围内进行恒温扩增。 在扩增的初始阶段，由于引物的延伸和初级扩增子的连续链置换，形成了哑铃状反应中间体，相较于PCR反应扩增机制更为复杂，但是却大大缩短了扩增时间，15-60分钟内即可实现109 -1010核酸扩增，可以一步完成基因的扩增和检测，已被广泛地应用于病原微生物检测和传染性疾病诊断等领域
LAMP的作用机制      LAMP反应可分为复制起始、循环扩增，延伸三个阶段（如下图所示）。LAMP不同于PCR，它不需要通过热变性来促进双链DNA转化为单链。在复制起始阶段，由于双链DNA在65°C条件下处于动态平衡稳定状态，一条LAMP引物可以与双链靶基因的互补序列结合，在链置换DNA聚合酶作用下，启动DNA的合成，最终形成哑铃状互补链，即为进入循环扩增的起始原料。 继而通过连续链置换进入循环扩增阶段，最后延伸阶段，扩增的最后产物是具有不同个茎环结构、多环花椰菜样结构的DNA的混合物，且产物DNA为扩增靶序列的交替反向重复序列。