萌新求问，Rt-PCR，qPCR，PCR的区别与不同是什么？

莺歌燕舞

萌新求问，Rt-PCR，qPCR，PCR的区别与不同是什么？
原文地址：https://www.zhihu.com/question/429890682

卡卡

这些技术都属于PCR的，而RT-PCR有两重意思：
① Real-Time PCR = quantitative PCR (qPCR) = quantitative Real-time PCR (qRT-PCR)，实时定量PCR，每个循环都会检测产物的量，更精准地给初始模板定量。
② Reverse Transcription PCR，即逆转录PCR，主要指将RNA逆转录之后跑PCR，然后在一定的循环次数之后跑胶，通过条带判断初始模板的相对多少。具体多少个循环，只能不断摸条件来确定。既要能看到明显的条带，又要避免所有样品都达到饱和状态。
可想而知，第一种技术的适用范围、灵敏度和可靠性都比第二种技术高，所以现在用逆转录PCR的人已经越来越少了。

检验医师

简单说，就是 rt 和 q 都是常规 PCR 的变种。
PCR 全称聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），指利用 Taq 和/或 Pfu 核酸酶惊醒的体外特异性扩增某特定核算序列
rtPCR 一般指反转录 PCR （Reverse Transcription PCR）其实就是将 PCR  与反转录结合，这样就可以获得多克隆的某一特异的 RNA 片段（通常是 mRNA）。首先将提取的 RNA 逆转录为 cDNA ，之后与常规 PCR 一致。引物与常规 PCR 没有太大不同（序列特异性引物或随机引物）有时候会用 mRNA 的特异性引物 Oligo dT （针对 mRNA 的标志性 poly - A 尾）。通常 rtPCR 是为了分析细胞中蛋白质表达情况，会以细胞中自然表达的 beta-actin 作为内参分析蛋白质表达情况（beta-actin 认为是管家基因，在同种细胞中表达恒定）
qPCR 指荧光实时定量 PCR （Quantitative real-time PCR），有时也会被称作实时/定量 PCR （rtPCR）。qPCR 使用一种特殊的探针—— Taqman 探针，其结构为一个 RNA 探针，两端分别加上一个发光基团 R 和一个吸光基团 Q 。而且 qPCR 不使用 Taq 聚合酶，因为 Taq 缺乏其他 DNA 聚合酶拥有的 5' - 3' 外切酶结构域及其即时矫正机制。



图源网络

此时 R 与 Q 同在探针上，距离较近，R 产生的荧光被 Q 吸收，所以不显出荧光；当互补链 DNA 合成时，DNA 聚合酶向下游移动，其 5' - 3' 外切酶结构域就会切割探针，依次释放出 R 和 Q。自由的 R 与 Q 距离较远，互相之间没有互作，所以不会影响 R 的荧光。
定义新参数 Ct 值（Cycle threshold，循环阈值）：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。阈值通常设定为 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的 10 倍（为什么这么设定？可能只是约定俗成吧……我不了解）。Ct 值由实验获得。
每个模板的 Ct 值与该模板的起始浓度的对数存在相关性（具体推导过程我忘了……），即：

n 为扩增反应进行的轮数，X 为初始模板量，Ex 为扩增效率（通常不考虑，作为常数看待），N 为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。
显然 X 的对数值与 Ct 值为负相关。利用已知 X 的标准品可作出标准曲线（有效地避免了对 Ex 的讨论），以 lgX 为横坐标，Ct 为纵坐标。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
注：qPCR 还有一种 SYBRGreenⅠ法，但是本人比较熟悉 Taqman 法，所以就懒得讲另外一个了，而且 SYBRGreenⅠ法感觉也比较简单易懂，如果题主还有疑问我再写吧……
再注：不同的 PCR 方法是可以搭配使用的，qPCR + rtPCR 通常称为 rt-qPCR，以避免与 qPCR 全称混淆……

同花顺

首先PCR是指聚合酶链式反应，通过体外利用聚合酶和引物扩增目的片段的一种技术。

• RT-PCR有两种翻译，也是不同的技术。一种是reverse transcription PCR，就是反转录PCR，用RNA反转录成cDNA链。一种是指real time PCR ，叫实时PCR，其实就是荧光定量PCR，用来检测基因转录水平的表达量，与下面的qPCR概念一样。
  
• qPCR就是quantity PCR，定量PCR，也是荧光定量PCR，检测基因转录水平的表达量。
  
• PCR就是一种技术，通过高温变性、低温复性，适温延伸的循环来扩增基因片段。PCR根据不同的实验目的可以分为许多种，例如上面说的RT-PCR、qPCR，还有反向PCR、梯度PCR、普通PCR等等。
  

Pcr技术中的引物的设计是根据什么来的？qPCR引物设计流程

继续前进

PCR：一种快速的DNA复制方法,由变性--退火(复性）--延伸三个基本反应步骤构成。

RT-PCR：反转录baiPCR(reverse transcription-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA（cDNA），再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。

QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物，使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。在扩增反映结束之后，可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行半定量分析，但分析的是PCR终产物，不能准确分析未经PCR信号放大之前的起始模板量。

real-time PCR：实时PCR(real-time PCR)属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。

Real-timePCR与reverse transcription PCR相结合，能用微量的RNA来找出特定时间细胞组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT PCR的组合又被称之为定量RT-PCR（QRT-PCR）。

扩展资料：
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。
PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。
英瀚斯生物-专业分子生物学实验定量PCR检测报告案例

卡卡

你说的RT-PCR是real-time PCR的话，和qPCR是一样的，都是荧光定量PCR。相比普通PCR，会加入染料，便于收集荧光信号。结果可以得出相对/绝对 浓度等多组数据，然后根据你的目的，对实际数据进行分析。还能通过ntc的ct值判断实验合不合格。一般需要单独的仪器，像Roche 480。
如果是reverse-transcription PCR的话，顾名思义，反转录PCR。相比普通PCR，最大的区别就是 以RNA为模板 了，可能还会加入RNase inhibitor等比较重要的试剂，结果得到cDNA。实际操作流程跟普通PCR没什么区别，仪器一般也和普通PCR一样。