检验规培成长记-微生物检验之培养基菌落的观察

二维码

始于检验，不止于检验，这里是“检验人成长记”。不定期分享检验小知识，日常生活。
感谢您的关注！
微生物部分往期内容：
1.微生物检验之细菌检验工作流程
2.微生物检验之真菌检验工作流程

前言：
这部分内容包括微生物实验室常见标本的培养，以及对应的平板菌落观察。

目录:
一、痰、咽细菌培养+嗜血杆菌培养( Sputum Culture )
二、血液及骨髓培养( Blood Culture )
三、尿液细菌培养(Urine Culture)
四、粪便培养( Stool Culture )
五、脑脊液培养( Cerebrospinal Fluid Culture )

菌落观察基本要点总结：

• 排除污染：如血培养需排除皮肤正常菌群的污染；尿培养需要排除尿道口和环境的细菌的污染。
  
• 对比观察：痰培养对比观察血平板和抗生素型巧克力平板；血培养对比需氧与厌氧培养；大便培养对比SS与麦康凯平板；脑脊液培养对普通平板与增菌肉汤的生长情况。
  
• 判断标本是否合格：如痰液培养需涂片观察标本是否合格。
  

一、痰、咽细菌培养+嗜血杆菌培养( Sputum Culture )

—临床意义：用以辅助诊断呼吸道感染。

—检验步骤：

1.标本类型: 痰液、气道抽吸物、咽拭子、支气管肺泡灌洗液等。
2.常见病原体：


3.培养基：血平板+嗜血型巧克力平板+沙保弱培养基。（以临床最为常见的痰液和灌洗液标本为例）

• 血平板：适合于大部分病原微生物生长。
  
• 嗜血型巧克力平板：加入了万古霉素，可抑制革兰阳性球菌的生长，还可用于分离流感嗜血杆菌、奈瑟菌等苛养菌。
  
• 沙保弱平板：适合于真菌生长。
  

4.菌落观察：
痰培养平板观察要点总结：

• 血平板和巧克力平板对比观察，万古霉素抑制阳性球菌。
  
• 常见致病菌：革兰阴性杆菌，酵母菌，金黄色葡萄球菌。（通常情况下具有临床意义）
  
• 当平板有少量致病菌生长时，需要先判断痰液标本是否合格，若不合格，则可考虑污染。
  
• 正常菌群混杂生长：人上呼吸道存在许多正常菌群。常见的球菌有奈瑟菌，链球菌，微球菌等；杆菌有棒状杆菌，类杆菌等。
  

左血平板，右巧克力平板。生长许多正常寄居奈瑟菌，呈黄色。

• 革兰阳性球菌：
  

筛选阳性球菌时，要注意血平板和巧克力平板对比观察，巧克力平板加有万古霉素，可抑制阳性球菌的生长。



血平板上的链球菌在巧克力平板上（C位）则不生长。



葡萄球菌在血平板上生长良好，在巧克力上则不生长。

• 革兰阴性球菌：
  

此图来源于网络，卡他莫拉菌形态典型，可整体推动。

• 革兰阴性杆菌：
  

在血平板和巧克力上均可生长，且菌落形态相似。总体特点为：湿润，较大，突起。



克雷伯菌，黏液型，可拉丝。



鲍曼不动杆菌

• 真菌：
  

真菌在血平板，巧克力平板和沙保弱平板均可生长。下面以白色念珠菌为例。



白色念珠菌，均可生长，有触角。

• 病毒：
  

病毒检测常通过PCR，胶体金等方法进行诊断。比如新冠病毒可使用PCR检测核酸，或使用胶体金方法检测抗原。
二、血液及骨髓培养( Blood Culture )

—临床意义:辅助诊断血流感染。

—检验步骤：

1.标本类型：血液或骨髓。
2.常见病原体：


3.培养基：血液培养瓶（需氧与厌氧瓶）
4.培养方法：自动血培养仪。10毫升/瓶（成人需氧瓶），1-3毫升/瓶（儿童瓶）。成人每次应采集2套-3套（一瓶需氧+一瓶厌氧为一套），每套从不同的穿刺点进行采集。
5.菌落观察：
观察要点：

• 厌氧和需氧平板应对比观察，确定细菌是兼性厌氧，需氧菌还是厌氧菌。
  
• 革兰阳性球菌：
  

葡萄球菌菌，兼性厌氧菌，需氧与厌氧均可生长。

• 革兰阴性杆菌：
  

大肠埃希菌，兼性厌氧菌，需氧与厌氧均可生长。

三、尿液细菌培养(Urine Culture)

—临床意义:辅助诊断泌尿系统感染。

—检验步骤：

1.标本类型: 清洁中段尿、导管尿、耻骨上膀胱穿刺尿。（注意采集容器须是无菌的，例如无菌杯，无菌管等）
2.常见病原体：


3.培养基：血平板（BA）
4.尿液培养方法：定量培养（连续划线法）。

由于自然排尿收集的标本很难避免会阴部及下尿道细菌污染，所以尿液需要定量培养。一般认为清洁中段尿标本中单种细菌菌落数≥105 CFU/ml可能为感染，<104 CFU/ml可能为污染，在两者之间需要根据具体情况进行评估。
导尿标本菌落≥103 CFU/ml，生长细菌3种以内都有意义，4种以上细菌生长无意义，应报告污染。
对于耻骨上膀胱穿刺尿液标本任意数目均有意义。

5.菌落观察：
观察要点：

• 要排除尿道污染，应观察原始区以外是否有菌落生长，若有，则污染可能性大。
  
• 观察平板上的细菌种类，若多且杂，有三种及上菌落，则污染可能性大。
  
• 常见致病菌：革兰阴性杆菌，革兰阳性球菌，酵母菌。
  
• 革兰阳性杆菌一般无临床意义，尿液结核分枝杆菌检测一般采用分子诊断试验。
  
• 革兰阳性球菌：
  

粪肠球菌



屎肠球菌

• 革兰阴性杆菌：
  

奇异变形杆菌，呈迁徙生长。



大肠埃希菌

四、粪便培养( Stool Culture )

—临床意义：辅助诊断肠道沙门菌和（或）志贺菌感染。

—检验步骤

1.标本类型: 粪便或直肠拭子。
2.常见的消化道感染病原体：

• 细菌：霍乱弧菌，金黄色葡萄球菌，沙门菌，志贺菌，大肠埃希菌，艰难梭菌，小肠结肠炎耶尔森菌等。
  
• 病毒：轮状病毒，腺病毒等。
  

3.培养基：SS琼脂与麦康凯平板。
4.培养方法：棋盘划线法。
5.菌落观察：
要点：

• SS琼脂：肠道强选择性培养基，可抑制肠道非致病菌，而沙门菌和志贺菌生长良好。大肠埃希菌生长良好，且能分解乳糖，呈红色菌落。沙门菌生长良好，呈黑色中心菌落。
  
• 麦康凯琼脂（MAC）：肠道弱选择性培养基。大肠埃希菌生长良好，且能分解乳糖，呈红色菌落。沙门菌生长良好，呈无色菌落。志贺菌生长良好，呈无色菌落。
  
• 若菌落形态疑似志贺菌和沙门菌，则需要做血清学鉴定试验确定。
  

未分离出沙门菌和志贺菌，为肠道正常菌群。

五、脑脊液培养( Cerebrospinal Fluid Culture )

—临床意义：辅助诊断中枢神经系统感染。

—检验步骤：

1.标本类型: 脑脊液。
2.常见病原体：


3.培养基：（常用组合）血平板+巧克力平板+沙保弱平板（真菌培养）+肉汤培养基（用于增菌）。
4.菌落观察：

• 革兰阳性球菌：
  

表皮葡萄球菌（血平板与普通巧克力平板）

• 革兰阴性杆菌：
  

洋葱伯克霍尔德菌（血平板与普通巧克力平板）血平板上菌落形态：中等大小，突起，菌落呈淡黄色。



大肠埃希菌（血平板与普通巧克力平板）

#检验人成长记#

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/597280013