ELISA常见封闭液

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不同的实验中我们都会遇到封闭液，像常规的ELISA实验中封闭液也是不可缺少的，那让我们来看看哪些是ELISA实验中常见的吧！
      ELISA的试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点，蔗糖封闭的原理：

• ELISA实验中，蔗糖本身没有封闭作用;
  
• 封闭液一般是BSA（牛血清白蛋白）、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶等或者是Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液PBST或者TBST等。
  
• 加蔗糖的主要目的是保护ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保护剂”的作用。
  
• 蔗糖溶液一般在ELISA板子经过BSA封闭后加，当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理;那一种更好需要你实验后来验证。但多数选择前者。
  

除此外，封闭剂还可用5%的脱脂乳，0.4%的明胶，但是实验表明前者比较好，后者不容易洗干净未结合上的明胶。

• SA是常用的封闭剂，成分单一适用于大多数情况。若免疫原是偶联BSA的， BSA有很强的免疫原性，会导致产生很多的针对BSA的抗体，为避免交叉反应，不能用BSA、脱脂奶粉等封闭，可以选用酪蛋白或无蛋白的封闭剂封闭。大部分BSA中有少量的抗体残留，会导致抗原/抗体之间的交叉反应，产生高背景，杂带较多或使得本底水平增高。
  
• 封闭血清的原理主要有两点，一是待检样本会有些与蛋白非特异性结合的物质，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。二是待检样本中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。
  
• 脱脂奶粉的优点是价钱便宜，但是由于成分相对复杂，所以适用范围要狭窄一些。磷酸化抗体也许会导致背景增加，此外，因为自身含有,不能用于标记的抗体系统。
  
• 酪蛋白 和BSA作用类似，普通酪蛋白不易溶解。中性和碱性条件下带有负电性，与同样带负电荷胶体金之间存在排斥力，而膜一般都是带正电荷，会与酪蛋白有一定的吸附作用，用酪蛋白封闭效果好些。无蛋白化合物  甲醛：与PVDF膜表面的微结构反应或者结合，使之失去结合蛋白的疏水力或者空间结构域。去污剂(吐温-20)：Tween-20是一种非离子型去污剂，有复性抗原的作用，与膜疏水性吸附，有很强的对非特异性吸附的洗脱作用，同样可以降低蛋白间的疏水作用，可提高特异性的识别能力。
  

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