本人生物工程，在实验室里跟着师兄师姐做实验，PCR成功率太低了，怎么样提升成功率？

心中u你

本人左思右想，总觉得没什么地方做的不对，但就是p不出来

原文地址：https://www.zhihu.com/question/472051265

同花顺

1.试剂的添加顺序注意一下，因为可能会对某些是试剂浓度有影响
2.注意酶容易失活，放在冰盒中操作
3.加入后进行离心操作，使加入的试剂充分混合

清风寡欲

这个问题，突变，温度，引物设计有问题等每个环节的细节都有可能导致引物挂不住或者乱结合，这太多可能性了

感恩由您

从易到难依次试：1.实验细节严格不出错（看一下会不会模板DNA浓度太低）；2.调整温度，多试几次，找到最佳条件；3.重新设计引物；4.多花点钱买大厂的试剂盒

继续前进

用的引物、模板和试剂跟你师兄师姐用的一样吗，温度时间设定是否一样？添加试剂时pcr管放在冰盒上面保持低温，加完试剂和引物后用振荡器涡旋振荡混匀再瞬时离心下。

卡卡

不知道你在做PCR的过程中是不是一个试管，一个试剂慢慢加的。
如果是这样做的话，可以试着将部分PCR的试剂先混在一起放在一边，毕竟PCR操作的试剂量一般不大所以有的时候操作中一不小心可能连试剂都没加进去，或者贴在管壁上，在放入PCR的仪器前可以再离心下。