核酸提取过程中组织样本取样及预处理应如何进行？

青草

在进行组织样本DNA提取之前，取样是一个非常关键的步骤，它直接影响到后续DNA提取的质量和成功率。不同类型的样本（如动物组织、植物组织、微生物等）取样的方法略有差异，但基本的原则和注意事项是相似的。
一、取样过程

• 准备工具和设备
  无菌手术刀或剪刀、镊子、一次性手套、1.5 mL无菌无酶离心管、研钵、液氮、无菌纱布或棉签（如果需要擦拭表面）。
  
• 个人防护
  穿戴适当的个人防护装备，如实验室外套、手套、口罩和护目镜，以防止生物危害和化学物质的接触。
  
• 样本选择与采集
  

动物组织：选择健康、无病变的部位，使用无菌器械迅速切取一定量的组织，立即放入无菌采样管中。对于需要长期保存的样本，可以将其放入含有液氮或干冰的容器中速冻，以保持样本的新鲜度。
植物组织：选取生长良好的部分，如嫩叶、根尖等，用无菌工具切割，同样迅速放入采样管中。植物样本也推荐使用液氮或干冰速冻。
微生物：从培养基中取样时，应确保使用无菌技术，避免杂菌污染。对于液体培养物，可以直接取一定体积的培养液；对于固体培养基上的菌落，可以使用无菌棉签轻轻刮取后放入采样管；对于真菌，可从菌丝或者菌褶剪取部分组织进行提取。
二、预处理
将样本放入研钵中，加入缓冲液使用研磨棒研磨成匀浆。或将样本放入1.5 mL无菌无酶离心管，加入少量缓冲液，使用手持研磨器进行充分研磨，具体研磨时间需要根据研磨器转速及样本类型进行确定。另外，在研磨过程中可加入PK，这有助于细胞充分分散，以便后续核酸提取步骤中组织细胞能被充分裂解，提高核酸提取效率。
三、注意事项：
无菌操作：在整个取样过程中，要保持工具和环境的无菌状态，避免样本被污染。提取过程中所用到的塑料耗材应选用无菌无酶的材料，如经过焦碳酸二乙酯（DEPC）处理。玻璃器皿（如匀浆器）等要彻底清洗，并尽可能采用200℃以上烤箱烘烤2 h。
合适的样本量：确保采集的样本量足够进行核酸提取和后续分析，请严格按照试剂盒说明书进行取样。
迅速处理：取样及预处理后应尽快进行提取，以减少核酸降解。
安全第一：在处理具有潜在危险性的样本时，如感染性病原体，必须遵循实验室安全规程，使用适当的生物安全柜和防护装备。
正确、规范的取样过程是确保DNA提取质量的基础，对后续的分子生物学实验至关重要。

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