【病理干货】组织湿标本处理流程3：脱水、透明、浸蜡与包埋

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新鲜组织固定完成到石蜡切片染色的过程中，需要经过组织样本处理和包埋两个环节。

组织样本处理

• 1.1 脱水：
  
• 脱水的目的在于将固定后组织内的水分逐渐置换出来，利于透明剂和石蜡的渗入。
  
• 脱水剂的种类可以分为非石蜡溶剂脱水剂和石蜡溶剂脱水剂，前者脱水后必须经过透明剂透明方可浸蜡，后者在脱水后可直接浸蜡。目前病理实验室常用的脱水剂为乙醇，属于非石蜡溶剂脱水剂，乙醇作为脱水剂的优点在于其与水的‘相似相溶原理’对梯度配比兼容性高且成本相对较低也更安全，利用浓度差可将组织水分置换出来，且多梯度乙醇脱水可以在迅速脱水的基础上较好的保持组织形态，利于透明和浸蜡更好地进行。
  
• 1.2 透明：
  
• 在乙醇脱水后的组织，需经过一种既与乙醇结合又与石蜡结合的溶剂作为媒介使石蜡浸入组织，这种溶剂会使组织呈现出不同程度的透明状态，过将这个过程称为透明。
  
• 目前病理实验室最常用的透明剂为二甲苯，一种无色透明但有刺激性味道的液体，二甲苯使用不当会让组织收缩变脆，因此二甲苯透明的时间在组织处理过程中也十分重要。
  
• 1.3 浸蜡：
  
• 浸蜡的目的是置换组织中的透明剂，石蜡渗入组织后，经冷冻使组织变硬为蜡块，利于切成薄片称为石蜡切片。
  
• 目前病理实验室通常使用熔点为58~60℃的石蜡将组织浸蜡，在密闭式全自动脱水剂中通常也会设置加压来加速浸蜡时间。
  
• 需要注意的是：在脱水之前需对脱水机进行程序设定：
  
• 前面也提到目前病理实验室都会选择用密闭式全自动脱水机，各个品牌的脱水机主要部件和功能都大同小异，而全自动脱水机使用过程中最重要的环节就是脱水程序的设置。
  
• 通常可以通过组织大小将脱水程序设置为大样本脱水程序和小样本脱水程序。大样本脱水程序时间长，小样本脱水程序时间短。
  
• 小样本脱水程序的梯度乙醇（70%、80%、90%和无水乙醇）脱水时间通常为常温每缸40 min~1 h、二甲苯透明时间通常为常温每缸30 min~40 min、石蜡浸蜡时间通常为每缸1 h，温度设置为高于石蜡熔点2℃左右。
  
• 大样本脱水程序的梯度乙醇（70%、80%、90%和无水乙醇）脱水时间通常为常温每缸1 h~1.5 h、二甲苯透明时间通常为常温每缸40 min~50 min、石蜡浸蜡时间通常为每缸1.5 h，温度设置为高于石蜡熔点2℃左右。
  
• 另外，脱水机需定期进行换液：
  全自动脱水机需要定期换液，换液周期通常根据处理组织样本的数量决定，具体的换液方式也都根据不同病理实验室的实际情况而决定：可以全部换新也可以将第一缸试剂废弃，后缸前移然后补充最后一缸新试剂。
  

包埋
包埋是指将浸蜡完成的组织通过包埋剂和模具包埋成蜡块的过程。包埋剂种类有很多，目前最常用的包埋剂为石蜡，和浸蜡的石蜡相同。
包埋时要注意将取材时的切面或病灶所在切面向下包埋，要格外注意组织包埋面的平整，从而使切片时组织在同一个切面上，防止因包埋不平整造成切片时切面组织形态结构不完整。
目前病理实验室常用的包埋工具为包埋、冷台一体机，包埋模具也分大、小、深、浅等多种型号，要根据组织的大小选择模具，更利于切片。
百斯医学Leica全自动组织脱水机



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百斯医学Leica包埋冷台一体机



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