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PLA技术看点：连接之中，放大信号

2025-6-30 13:33| 编辑: 归去来兮| 查看: 230| 评论: 0|来源: 小桔灯网 | 作者：净姐

摘要: Proximity Ligation Assay，邻近连接扩增技

PLA

Proximity Ligation Assay，邻近连接扩增技术

是一种高度敏感和特异的蛋白检测方法，最初由Ulf Landegren教授团队开发，广泛用于蛋白质相互作用、低丰度蛋白检测、以及蛋白修饰（如磷酸化）研究等领域。

PLA的基本原理：

PLA利用了抗体的特异性结合能力，结合DNA的连接和扩增能力。

步骤简述：

抗体结合靶标

两种不同的抗体分别识别目标蛋白（或两个相互作用的蛋白）上的两个位点。这两个抗体分别连接有短的DNA寡核苷酸探针（称为“PLA探针”）。

探针接近后连接

如果两种抗体足够接近（通常小于30–40nm），两个DNA探针可以通过连接酶（如T4 DNA ligase）连接成一个完整的DNA模板。

扩增和检测

连接后的DNA可以通过扩增信号被大量扩增，然后通过荧光探针或者其他方法检测信号。

图注：SP-PLA技术流程

PLA技术类型：

类型	说明	应用方向
单分子PLA（smPLA）	靶标是单个蛋白，检测其存在	超灵敏蛋白定量
双分子PLA（Duolink®）	靶标是两个蛋白复合体或相互作用	蛋白互作、共定位验证
原位PLA （in situ PLA）	在细胞或组织中进行，空间信息可保留	共定位验证、修饰检测
溶液中PLA (solution PLA)	纯化蛋白或血清样本中使用	免疫检测、诊断

应用目标	推荐术语/方法
定量检测 CSF/血清中的蛋白	溶液 PLA / SP-PLA
观察两个蛋白是否互作	双分子 PLA (即 in situ PLA with dual antibodies)
检测蛋白是否发生修饰（如泛素化）	单分子 in situ PLA
想要获取空间定位信息	一定使用原位in situ PLA （无论是单分子或双分子）

PLA vs Simoa/PEA 技术对比:

特性	PLA（SP-PLA）	Simoa	PEA
灵敏度	fg/mL 级别（Aβ聚集体）	fg/mL 级（NfL等）	fg/mL 级，支持高通量
特异性	高（双抗夹心和邻近连接）	中等 (双抗夹心)	蛋白互作、共定位验证
样本需求	极少≥1-5 μL	少量	更适合血液高通量样本
多重能力	中等(自行扩展)	中等	高（多达数十/百标志物）
灵敏度	中等（探针偶联+扩增）	高（特殊分隔设备）	高（试剂盒及分析算法）
灵敏度	低	中等	高
灵敏度	正在开发中	成熟应用，FDA Breakthrough	Olink商用广泛

图注： PLA probe制备

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